【産品名稱】貓瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒(熒光PCR法) 

【包裝規格】50T/盒

【預期用途】

本試劑盒适用于(yú)檢測的(de)扁桃體、淋巴結等組織病變部與健康部交界處組織、全血等标本中貓瘟病毒DNA，适用于(yú)貓瘟病毒感染的(de)輔助診斷。

【檢驗原理】

本試劑盒采用TaqMan探針法實時(shí)熒光PCR技術，通過設計一(yī / yì ／yí)對貓瘟病毒特異性引物，結合一(yī / yì ／yí)條特異性探針，用熒光PCR技術對貓瘟病毒的(de)核酸進行體外擴增檢測，用于(yú)臨床上(shàng)對可疑感染者的(de)病原學診斷。

【試劑組成】

備注：不(bù)同批号的(de)試劑盒組分不(bù)宜交叉使用。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反複凍融≤5次，有效期12個(gè)月。

【适用儀器】

ABI系列 、安捷倫MX3000P/3005P、Bio-Rad等系列熒光定量PCR檢測儀。

【标本采集】

病死或撲殺動物，取分泌物、血液、脾髒、扁桃體、腎髒和(hé / huò)淋巴結等

【保存和(hé / huò)運輸】

上(shàng)述标本短期内可保存于(yú)-20℃，長期保存可置-70℃，但不(bù)能超過6個(gè)月，标本運送應采用2~8℃冰袋運輸，嚴禁反複凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區）

1.1 樣本前處理

組織樣品：每份組織分别從3個(gè)不(bù)同的(de)位置稱取樣品約1g，手術剪剪碎混勻後取0.5g于(yú)研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水後繼續研磨，待勻漿後轉至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上(shàng)清液100μL于(yú)1.5mL滅菌離心管中；全血樣本：待血凝固後，取血清100μL于(yú)1.5mL滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

按照相應DNA核酸提取試劑盒進行核酸提取，核酸提取産物-20℃保存。

2. 試劑配制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所需要(yào / yāo)的(de)PCR反應管管數爲(wéi / wèi)N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照，每個(gè)測試反應體系配制如下表： 

3. 加樣（樣本處理區）

将步驟1提取的(de)DNA、陽性質控品、陰性質控品各取5μL，分别加入相應的(de)反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR擴增（核酸擴增區）

4.1 将待檢測反應管置于(yú)熒光定量PCR儀反應槽内；

4.2 設置好通道(dào)、樣品信息，反應體系設置爲(wéi / wèi)25μL；

熒光通道(dào)選擇： 檢測通道(dào)選擇FAM， 淬滅通道(dào)選擇NONE，參比熒光選NONE。

4.3 推薦循環參數設置：

5. 結果分析判定

5.1 結果分析條件設定

5.2 設置Baseline和(hé / huò)Threshold：一(yī / yì ／yí)般直接按機器自動分析的(de)結果分析，當曲線出(chū)現整體傾斜時(shí)，根據分析後圖像調節Baseline的(de)start值(一(yī / yì ／yí)般可在(zài)3~15範圍内調節)、stop值(一(yī / yì ／yí)般可在(zài)5~20範圍内調節)，以(yǐ)及Threshold的(de)Value值(上(shàng)下拖動阈值線至高于(yú)陰性對照)，重新分析結果。

5.3 結果判斷

陽性：檢測通道(dào)Ct值≤35.0，且曲線有明顯的(de)指數增長曲線。

可疑：檢測通道(dào)Ct值>35.0，且出(chū)現典型擴增曲線的(de)樣本建議重複試驗，重複試驗結果出(chū)現Ct值≤35.0和(hé / huò)典型擴增曲線者爲(wéi / wèi)陽性，否則爲(wéi / wèi)陰性。

陰性：樣本檢測結果無Ct值且無明顯的(de)擴增曲線。

6. 質控标準

陰性質控品：無明顯擴增曲線或無Ct值顯示；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且Ct值≤30；

以(yǐ)上(shàng)條件應同時(shí)滿足，否則實驗視爲(wéi / wèi)無效。

7. 檢測方法的(de)局限性

Ø 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以(yǐ)及保存質量有關；

Ø 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出(chū)現假陽性結果；

Ø 陽性對照、擴增産物洩漏，會導緻假陽性結果；

Ø 病原體在(zài)流行過程中基因突變、重組，會導緻假陰性結果；

Ø 不(bù)同的(de)提取方法存在(zài)提取效率差異，會導緻假陰性結果；

Ø 試劑運輸，保存不(bù)當或試劑配制不(bù)準确引起的(de)試劑檢測效能下降，出(chū)現假陰性或定量檢測不(bù)準确的(de)結果；

Ø 本檢測結果僅供參考，如須确診請結合臨床症狀以(yǐ)及其他(tā)檢測手段。

【注意事項】

Ø 所有操作嚴格按照說(shuō)明書進行；

Ø 試劑盒内各種組分使用前應自然融化，完全混勻并短暫離心；

Ø 反應液應避光保存；

Ø 反應中管蓋需蓋緊；

Ø 使用一(yī / yì ／yí)次性吸頭、一(yī / yì ／yí)次性手套和(hé / huò)各區專用工作服；

Ø 樣本處理、試劑配制、加樣需在(zài)不(bù)同區進行，以(yǐ)免交叉污染；

Ø 實驗完畢後用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作台和(hé / huò)移液器；

Ø 試劑盒裏所有物品應視爲(wéi / wèi)污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。